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1    新型冠狀病毒(2019-nCoV)重組抗原及多克隆抗體

新型冠狀病毒(2019?nCoV)IgM/IgG抗體用重組抗原，與新型冠狀病毒(2019?nCoV)的抗體IgG/IgM反應，而不與其它肺部感染性冠狀病毒等發生反應，也不與正常人血清發生反應，特異性高。新型冠狀病毒(2019?nCoV)抗體診斷抗原可以利用大腸桿菌重組表達制備，具有抗原表位豐富，檢測靈敏度更高，成本較低。本發明提供的多克隆抗體，有望作為用于臨床治療的診斷指標，并開發阻斷病毒感染的治療性抗體。

2    一種以腺病毒為載體的冠狀病毒疫苗及其制備方法  

目的氨基酸序列、目的基因序列、包含所述目的基因序列的腺病毒載體、外源轉入所述腺病毒載體的細胞以及以包含所述目的氨基酸序列的冠狀病毒疫苗。提供了5種冠狀病毒疫苗的目標氨基酸以及相應的基因序列，進一步使用腺病毒為載體，以整合腺病毒E1基因的細胞為包裝細胞系，經包裝獲得重組腺病毒載體冠狀病毒疫苗。提供的冠狀病毒疫苗可以快速制備，適用于新型冠狀病毒2019?nCoV的預防，具有良好的免疫原性，可以誘導高水平的抗體表達。

3    一種針對冠狀病毒的核酸疫苗及其制備方法 

包含所述目的基因序列的真核細胞表達載體以及包含所述真核細胞表達載體的核酸疫苗。本發明提供的氨基酸序列為冠狀病毒β家族較為保守的序列，且這些序列均能與ACE2結合，是引起免疫反應的重要抗原決定簇。因此，本發明提供的核酸疫苗具有同時預防2003 Sars?CoV和2019?nCoV引起的疾病的應用前景。

4    一種針對SARS-CoV-2的重組蛋白疫苗及其制備方法

包含所述目的基因序列的真核細胞表達載體、表達所述目的氨基酸序列的細胞以及包含所述目的氨基酸序列的重組蛋白疫苗。本發明提供的重組蛋白疫苗能夠有效誘導機體產生細胞免疫和體液免疫，且可以快速制備，適用于新型冠狀病毒SARS?CoV?2的預防。

5    一種β冠狀病毒抗原、β冠狀病毒二聯疫苗及其制備方法和應用

包括：按照(A?B)?(A’?B’)樣式排列的氨基酸序列或(A?B)?C?(A’?B’)樣式排列的氨基酸序列，其中：A?B表示來自β冠狀病毒的表面刺突蛋白的受體結合區的部分氨基酸序列或全部氨基酸序列，A’?B’表示來自另一種β冠狀病毒的表面刺突蛋白的受體結合區的部分氨基酸序列或全部氨基酸序列，C表示連接氨基酸序列，所述β冠狀病毒抗原為單鏈異源二聚體結構。使用該β冠狀病毒抗原獲得了一種β冠狀病毒二聯疫苗，該二聯疫苗能夠刺激小鼠產生強烈的抗體反應。

6    一種COVID-19冠狀病毒重組S1蛋白及其應用

還提供了COVID?19冠狀病毒S1重組蛋白的制備方法，該方法能提高S1重組蛋白在真核細胞中表達量，達到55?70mg/L。本發明的S1重組蛋白與感染了COVID?19病毒的病人血清或接種了COVID?19疫苗的動物血清均有交叉反應，可用于制備多克隆抗體和單克隆抗體、開發抗體或抗原的診斷試劑以及設計和篩選COVID?19冠狀病毒治療藥物。S1?Fc融合蛋白免疫動物后產生的抗體識別COVID?19冠狀病毒，可用于制備冠狀病毒疫苗，市場價值巨大。

7    一種新型冠狀病毒口服活疫苗及其制備方法

通過轉化到減毒鼠傷寒沙門氏菌SL7207進行融合表達，得到的LTB26?RBD融合蛋白，即構建得到新型冠狀病毒口服活疫苗；其中，所述LTB26的DNA序列如SEQ ID NO.1所示，所述RBD的DNA列如SEQ ID NO.2所示，所述柔性肽linker的DNA序列如SEQ ID NO.3所示，所述LTB26?RBD融合蛋白的DNA序列如SEQ ID NO.4所示。

8    一種新冠病毒疫苗的表達載體及其構建方法、應用和疫苗

將目的基因片段和載體片段進行連接，得到所述表達載體。本發明實施例通過同時表達冠狀病毒S蛋白受體結合區與NP蛋白，使該表達載體感染的細胞不但可以誘導抗體反應還能誘導T細胞反應，從而有效誘導體液免疫和細胞免疫，為受試者提供更強的免疫保護。

9    基于減毒流感病毒載體的新型冠狀病毒肺炎疫苗

并且所述病毒株的基因組中含有截短的流感病毒NS1蛋白基因序列。所述減毒流感病毒株可用于制備疫苗，所述疫苗可通過噴鼻免疫方式接種，誘導機體產生針對SARS?CoV?2和流感病毒的保護性免疫(包括體液免疫和粘膜免疫)，對新型冠狀病毒肺炎和流感具有雙重免疫作用。

10    新型冠狀病毒S蛋白及其亞單位疫苗

所述新型冠狀病毒亞單位疫苗包含所述的重組S蛋白以及藥學上接受的佐劑。本發明應用獲取的具有生物活性的三聚體構象的S蛋白，制備成三聚體亞單位疫苗，免疫小鼠后能夠誘導小鼠產生針對SARS?CoV?2的具有免疫保護作用的中和抗體，對免疫小鼠進行新型冠狀病毒的致死性攻毒感染后，可以提供100％的保護效率。

11    SARS-CoV-2編碼蛋白來源的T細胞表位多肽及其應用

還包含編碼所述多肽表位的融合蛋白、核苷酸序列或其互補序列的核酸分子，以及含有所述核酸分子的載體，以及包含所述多肽、融合蛋白、核酸分子或載體作為活性成分的藥物組合物，以及所述多肽、融合蛋白、核酸分子、載體、藥物組合物的用途。

12    一種預防SARS-CoV-2重組蛋白疫苗及其制備方法

提供的重組蛋白疫苗能夠有效誘導機體產生細胞免疫和體液免疫，且可以快速制備，適用于SARS?CoV?2的預防。

13    一種DC細胞靶向的納米SARS-CoV2 S蛋白多肽池疫苗及其制備方法

通過甘露糖修飾納米顆粒，使疫苗特異性靶向DC細胞，加速DC細胞對SARS?CoV2抗原的獲取，促進DC細胞成熟，高效遞呈抗原給CTL細胞，促進CTL細胞增殖，增強CTL細胞殺傷作用，從而提高多肽疫苗的免疫效力。本發明利用生物信息學技術進行多肽預測分析，利用納米顆粒靶向技術高效激活DC細胞，有效激活抗SARS?CoV2細胞免疫作用，為防控COVID?19提供更加安全有效的DC細胞靶向的納米SARS?CoV2S蛋白多肽池疫苗。

14    一種雙功能抗原、其制備方法及應用

提供的雙功能抗原由肺炎球菌莢膜多糖和SARS?CoV?2的刺突S蛋白或其片段共價偶聯構成；所述雙功能抗原中，各血清型的所述肺炎球菌莢膜多糖與所述刺突S蛋白或其片段的質量比為0.2?2:1。本發明所述的雙功能抗原較其使用的刺突S蛋白或其片段抗原自身，能顯著提高針對新冠病毒的中和抗體水平；且同時能產生較高水平的針對肺炎球菌莢膜多糖的特異性抗體。

15    抗SARS-CoV-2感染的組合物

提供了抗SARS?CoV?2感染的組合物，由S1?WT蛋白和S1?Mut蛋白組成，其中，S1?WT蛋白含有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；S1?Mut蛋白含有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列，或者在SEQ ID No.2的基礎上含有以下至少一種突變：K417N、N501Y、D614G。本發明提供的由S1?WT蛋白和S1?Mut蛋白組成的組合物，能夠誘導產生SARS?CoV?2變異株和野生型病毒的中和抗體，對開發二價重組疫苗的潛在臨床應用具有重要意義。

16    一種納米化的冠狀病毒抗原及其應用 

納米化偶聯RBD抗原克服了RBD單體免疫原性不足的缺點，大大提高了小鼠針對2019?nCoV的中和抗體滴度產生。

17    呈遞SARS-COV-2的RBM不同區域肽表位的病毒樣顆粒疫苗構建方法 

將該質粒轉化大腸桿菌DH5α或BL21感受態細胞上，用IPTG誘導、純化，得到呈遞P2，P3，P4，P6的病毒樣顆粒疫苗。只需幾次免疫注射該疫苗即可誘導強的針對自身分子的、有持續作用的中和性抗體，以中和新型冠狀病毒的感染，為新型冠狀病毒疫苗研發提供新思路并奠定堅實基礎。

18    重組痘苗病毒、痘苗病毒載體疫苗及其應用與制備方法

所述制備重組痘苗病毒的方法包括將所述重組核酸序列引入痘苗病毒的基因組的目標基因的左臂及右臂之間，得到重組穿梭載體并轉染入宿主細胞，形成所述重組痘苗病毒。還公開了編碼具有新型冠狀病毒S蛋白的重組核酸序列及重組病毒載體。

19    基于納米顆粒的冠狀病毒疫苗

冠狀病毒疫苗可用于預防和/或治療冠狀病毒感染。

20    抗新型冠狀病毒疫苗及其制備方法

抗新型冠狀病毒疫苗為由脂質外層和核糖核酸分子內核構成的納米顆粒結構，脂質外層由脂質體構成，核糖核酸分子包括用于編碼產生靶向溶酶體的第一抗原的mRNA和/或用于編碼產生靶向胞質的第二抗原的mRNA，和用于編碼產生外分泌的靶向B細胞的第三抗原的mRNA。疫苗能產生多樣性的免疫反應。

21    禽傳染性支氣管炎病毒N蛋白的T細胞抗原表位多肽及其應用  

設計一系列覆蓋全長氨基酸序列的重疊肽段，將這些重疊多肽分別刺激淋巴細胞，檢測IBV特異性T細胞受多肽刺激后分泌IFN?γ的水平，初步篩選出功能性T細胞抗原表位多肽，將該功能性T細胞抗原表位多肽分別刺激免疫雞脾臟淋巴細胞，通過IFN?γ胞內細胞因子染色試驗獲得能有效誘導CD8+T淋巴細胞分泌IFN?γ的肽段。本發明獲得的抗原表位多肽具有強免疫原性，可用于制備IBV多表位疫苗，安全性高，特異性好，在IBV的防控工作中具有潛在的應用價值。

22    抗SARS-CoV-2感染的蛋白以及用該蛋白制備的疫苗 

提供了用于預防和/或治療SARS?CoV?2感染的疫苗。本發明主要是通過誘導體內產生抗體等免疫反應，阻斷SARS?CoV?2的S蛋白與宿主細胞ACE2受體的結合，從而幫助宿主抵抗冠狀病毒感染。

23    一種表達新冠病毒Spike蛋白重組副流感病毒5型制備和應用
冠狀病毒Spike蛋白突變體的氨基酸序列上不含有Furin蛋白酶裂解位點。結果表明，免疫重組病毒rPIV5?SH?Spike組小鼠體內產生抗體針對新冠病毒Spike蛋白的特異性抗體，而rPIV5對照組小鼠未能檢測到針對新冠病毒Spike蛋白的特異性抗體。表明rPIV5?SH?Spike重組病毒免疫小鼠能夠刺激小鼠產生針對Spike蛋白的特異性抗體。

24    一種貓冠狀病毒S重組蛋白及其制備方法

首次發現了位于FCoV S2蛋白中的蛋白片段具有良好的反應原性和免疫原性，可作為后續研究和開發FCoV疫苗及相關診斷檢測試劑盒的基礎。

25    基于流感病毒載體的新型冠狀病毒疫苗及其制備方法

這使得該疫苗能誘發兩種抗原的免疫反應，達到同時預防流感病毒和新冠肺炎病毒的目的，一次性解決流感和新冠兩大傳染病對社會經濟等帶來的影響。同時，流感疫苗基于現有成熟流感平臺技術，可大規模制備生產，且流感疫苗使用歷史悠久，具有良好安全性。

26    重組慢病毒載體、2019-nCoV假病毒及其制備和應用

采用本發明制備得到的SARS?CoV?2假病毒無致病性，具有安全性好，制備效率高，純度高，且質控方法準確可靠等特性，可長期穩定大量制備，為后續臨床廣泛應用提供良好基礎。

27    新型冠狀病毒B．1．1．7英國突變株RBD的基因及其應用 

通過優化野生型新型冠狀病毒B．1．1．7英國突變株RBD的基因序列，并結合篩選確定了相對最佳序列，優化后序列產生的克隆表達效率比野生型新型冠狀病毒B．1．1．7英國突變株RBD序列表達效率大幅提高，從而，本發明的新型冠狀病毒B．1．1．7英國突變株RBD的基因更有利于用于制備新型冠狀病毒疫苗。

28    一種新型冠狀病毒的mRNA疫苗 

將特異重組質粒進行體外轉錄，可以得到多聚化TF?RBD mRNA。進一步的，發明人制備了負載TF?RBD mRNA的脂質納米粒。對于新型冠狀病毒的防控具有重大的應用推廣價值。

29    基于新冠病毒中和抗原表位的多價融合蛋白疫苗

疫苗主要包含了新型冠狀病毒突刺蛋白S1區域；具有強烈抗原性并具有廣泛人群免疫反應的抗原表位以及具有刺激抗體生成的佐劑；疫苗可以通過皮下或肌肉注射導致系統性免疫，也可通過噴鼻誘導對防止呼吸道病毒具有重要意義的粘膜免疫；通過有選擇性地選擇關鍵抗原表位作為免疫原，可以精準產生具有中和性的抗體，避免產生其他非中和性抗體，從而避免潛在的ADE風險，同時避免大量非中和抗體生成所導致過度“免疫消耗”；同時本發明設計和制備所需時間很短，生產簡便，可以在新冠病毒，變異新冠病毒，或其他類似病毒發生流行后第一時間內生產和使用；在短時間內達到群體免疫的目的。

30    一種表達冠狀病毒受體結合域串聯二聚體的重組副流感病毒5型載體

實驗證明rPIV5?tr?RBD對2019?nCoV冠狀病毒具有優良的免疫保護效果。本發明具有重要的應用價值。

31    新型冠狀病毒樣顆粒及其制備方法和應用

上述新型冠狀病毒樣顆粒的制備方法制得的新型冠狀病毒樣顆粒用于疫苗時具有良好的安全性、穩定性及有效性。

32    新型冠狀病毒B.1.351南非突變株RBD的基因及其應用

通過優化野生型新型冠狀病毒南非B.1.351南非突變株RBD的基因序列，并結合篩選確定了相對最佳序列，優化后序列產生的克隆表達效率比野生型新型冠狀病毒B.1.351南非突變株RBD序列表達效率大幅提高，從而，本發明的新型冠狀病毒B.1.351南非突變株RBD的基因可以用于制備新型冠狀病毒疫苗。

33    一種提高新冠疫苗對特殊人群抗體分泌的動物實驗操作方法

該提高新冠疫苗對特殊人群抗體分泌的動物實驗操作方法，自體淋巴細胞通過在體外誘導后進行回輸，在實驗中可得出數據顯示，體外誘導的淋巴細胞自體回輸的抗體水平呈跳躍式升高，此實驗數據可表明此操作方法可以克服老年人和體弱多病人群對于疫苗反應遲鈍或不反應狀態，提高特性病毒免疫清除作用，從而減少重癥病例的發生率，并且，對于重癥病例具有一定的治療作用。

34    具有異源刺突蛋白的4/91 IBV疫苗  

其編碼異源S(刺突)蛋白或其片段。進一步地，本發明涉及一種免疫原性組合物，其包含所述編碼異源S(刺突)蛋白或其片段的4/91IBV。再者，本發明涉及用于免疫對象的方法，包括給所述對象施用本發明的免疫原性組合物。此外，本發明涉及在有需要的對象中治療或預防由IBV引起的臨床體征的方法，所述方法包括給對象施用治療有效量的根據本發明的免疫原性組合物。

35    2019新型冠狀病毒N蛋白線性表位肽和單克隆抗體及應用

提供的2019新型冠狀病毒N蛋白線性表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1?5任一所示。將含有前述線性表位肽的多肽載體蛋白偶聯免疫小鼠制備獲得多株雜交瘤細胞分泌可以特異性識別2019新型冠狀病毒N蛋白且具有生物活性的單克隆抗體。

36    基于水皰性口炎病毒載體的重組新型冠狀病毒及其制備方法與應用

 本發明公開了基于水皰性口炎病毒載體的重組新型冠狀病毒及其制備方法與應用。所述重組新型冠狀病毒為將水皰性口炎病毒的糖蛋白G替換為囊膜蛋白S后得到的病毒；所述囊膜蛋白S包含2019?nCoV(SARS?CoV?2)的囊膜蛋白S胞外區或其部分序列。通過實驗證明：本發明的重組新型冠狀病毒可以模擬2019?nCoV(SARS?CoV?2)入侵細胞的過程，并能激發機體產生針對2019?nCoV(SARS?CoV?2)的免疫反應，不僅是研究2019?nCoV(SARS?CoV?2)感染過程的理想工具，而且還可以開發成疫苗，對篩選抑制病毒入侵的抑制劑和疫苗研制具有重要意義。

37    三聚體化新冠病毒受體結合域、其制備方法與應用

涉及三聚體化新冠病毒受體結合域、其制備方法與應用。構建了并表達了三聚體化新冠病毒RBD。本發明將目的片段連接至pFastBac1載體，轉化到DH10Bac感受態細胞后獲得重組桿粒。將重組桿粒轉染至sf9細胞后進行病毒拯救，獲得重組桿狀病毒，將重組桿狀病毒接種懸浮sf9細胞96小時后收獲培養基進行純化。PCR及WesternBlot結果顯示，重組桿狀病毒構建成功，并可以成功表達外源蛋白RBD?6HB。對純化后的蛋白進行SDS?PAGE及WesternBlot鑒定，結果顯示，純化效果良好，為后期的疫苗及基礎研究奠定了基礎。

38    一種新冠病毒抗原及其制備方法與應用 

新冠病毒抗原包括一種融合蛋白，該融合蛋白包含Spike蛋白S1結構域部分和HSA部分，其中在所述Spike蛋白S1結構域部分中對應于Spike蛋白的第685位精氨酸被替換為甘氨酸。本發明制備的融合蛋白作為新冠病毒血清抗體檢測試劑盒中關鍵抗原成分，用于新冠抗體的檢測；作為疫苗給予動物或人產生抗體，用于新冠病毒的預防。作為治療性藥物給予新冠病人，治療新型冠狀病毒肺炎。

39    一種親和肽在制備抗冠狀病毒藥物中的應用   

所述的親和肽包括如SEQ ID NO.1所示的序列或其變體。本發明還公開了該親和肽在檢測冠狀病毒中的應用。

40    一種用于防治新冠病毒感染的重組質粒、重組乳酸桿菌表達系統及其應用   

與人體呼吸道、眼結膜、消化道及其它粘膜表面特異性受體(ACE2)結合，從而使得新冠病毒與機體黏膜表面結合的位點被S1蛋白優先占位封閉，進而高效阻斷和干擾新冠病毒與人粘膜特異性受體結合，預防新冠肺炎發生，減少新冠肺炎感染人群數量，快速阻遏其全球漫延。

41    一種新型冠狀病毒T細胞的抗原表位肽及其應用 

利用其制備得到了pMHC復合物單聚體，進一步制備得到pMHC復合物多聚體，其可以用于新型冠狀病毒感染康復者外周血內抗原特異性T細胞的檢測，并用于體外的T細胞活化實驗，這些新型冠狀病毒T細胞抗原表位肽可以應用到新型冠狀病毒相關的免疫檢測和疫苗研發中，值得深入研究和大力推廣。

42    新型冠狀病毒肺炎副粘病毒疫苗株及其構建方法 

構建的新型冠狀病毒肺炎副粘病毒疫苗株能夠穩定高效表達新冠S1蛋白，注射動物后能夠誘導機體產生抗體。而且，可以在禽類和犬類中進行實驗，能夠節約時間、降低成本，同時由于其產量大，更利于實際生產。

43    一種融合蛋白及其在制備新型冠狀病毒亞單位疫苗中的應用

通過將SARS?CoV?2的棘突蛋白的RBD結構域與免疫球蛋白Fc進行融合表達獲得重組融合蛋白，Fc的鉸鏈區以及恒定區能通過二硫鍵將IgG抗體的兩條重鏈相結合，實現RBD的二聚體，制備的重組融合蛋白可用于作為針對新型冠狀病毒肺炎的重組蛋白疫苗。該重組蛋白疫苗可在小鼠體內誘導產生高滴度的特異性IgG抗體和中和抗體，抗體水平可維持3個月以上，該疫苗能同時誘導小鼠產生細胞免疫。

44    針對新型冠狀病毒的疫苗以及其應用

首次揭示一種新的改造冠狀病毒刺突糖蛋白S1亞基以提高其免疫原性的方法，包括：將冠狀病毒刺突糖蛋白S1亞基與定點突變的IgG Fc連接；本發明也揭示了兩者融合后獲得的融合多肽以及以之與鋁佐劑混合后獲得的疫苗。本發明的融合多肽能夠被有效地表達，表達后能夠形成正確的蛋白空間結構，其與鋁佐劑混合而獲得的疫苗具有良好的免疫原性。

45    一種以痘苗病毒天壇株為載體的新冠疫苗及其構建方法  

用于新冠疫苗的重組病毒的構建方法包括如下步驟：(1)使用引物對P233、P234擴增RBD 5‘端片段，使用引物對p235、p236擴增RBD 3’片段，再通過重疊PCR擴增全長RBD片段，各引物序列分別如SEQ ID NO.1?4所示；(2)以pCDNA3.1?LARA為骨架載體，通過酶切、連接、轉化將RBD片段連入骨架載體上，構建重組穿梭質粒pCDNA3.1?LARA?S2RBD；(3)通過脂質體介導法將重組穿梭質粒轉化到痘苗病毒天壇株中進行同源重組，得到重組病毒，該重組病毒能誘導產生新冠病毒的中和抗體。

46    一種新冠肺炎疫苗以及疫苗套件

所述特異蛋白乙為EBOV的GP蛋白或EBOV GP蛋白的RBD區段。本發明還保護所述重組病毒在制備疫苗中的應用。所述疫苗為SARS?CoV?2和EBOV二聯疫苗或SARS?CoV?2疫苗。本發明對于SARS?CoV?2的防控具有重大價值。

47    一種COVID-19亞單位疫苗及其制備方法與應用

利用本發明的融合蛋白與佐劑配置得到的疫苗組合物，可以增加疫苗的溶解度、穩定性，增強疫苗免疫原性，延長疫苗在體內半衰期。本發明的融合蛋白及其疫苗組合物可抑制SARS?CoV?2野生型和/或變異型毒株的復制、傳播或阻止其在宿主體內定居，從而能有效預防和/或治療SARS?CoV?2野生型和/或變異型毒株引起的新型冠狀病毒肺炎。